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氯苯那敏含量測定方法學(xué)
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摘要：本文研究的目的是通過對氯苯那敏含量測定方法的專屬性、線性、穩(wěn)定性、回收率、精密度、范圍等實(shí)驗(yàn)，證明其含量測定方法適應(yīng)檢測要求，能為氯苯那敏含量測定提供可靠的檢測方法，并對馬來酸氯苯那敏的工藝合成配比起到指導(dǎo)作用。
關(guān)鍵詞：氯苯那敏;方法學(xué);含量測定;專屬性;線性
1 檢驗(yàn)方法
HPLC法：流動相：水：乙腈：甲醇：四氫呋喃(1375：800：200：125)對照溶液的制備：精密稱取工作對照品(馬來酸氯苯那敏)約0.30g，加流動相稀釋至25ml，精密取1.0ml，置25ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。
樣品溶液的制備：精密稱取氯苯那敏樣品約0.20g，加甲醇溶解并稀釋至25ml，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。分別取對照品溶液與樣品溶液20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算即得。
色譜條件：檢測器：紫外檢測器檢測波長：254nm
色譜柱：C18，25cm，5μm 流速：1.5ml/min
2 分析方法的驗(yàn)證
2.1 專屬性試驗(yàn):檢驗(yàn)方法HPLC法：取氯苯那敏樣品，按不同的色譜分離模式：反相色譜與離子交換色譜分別進(jìn)行試驗(yàn)。
(1)反相色譜分離：按本驗(yàn)證方案中驗(yàn)證方法與操作中的檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn)。
(2)離子交換色譜分離：
色譜條件：檢測器：紫外檢測器;檢測波長：220nm;
色譜柱：離子交換柱柱長：25cm;
流速：0.8ml/min;
流動相：乙腈：0.075mol/L磷酸氫二鈉(用H3PO4調(diào)PH=4.0)=35∶65
對照溶液的制備：
精密稱取工作對照品(馬來酸氯苯那敏)約0.30g，加乙腈稀釋至25ml，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。
樣品溶液的制備：
精密稱取氯苯那敏樣品 約0.20g，加乙腈稀釋至25ml，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定：取對照品溶液20μl、樣品溶液20μl分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。量取峰面積值，按外標(biāo)法計算。兩種檢測方法結(jié)果相對偏差≤0.5%。
測定結(jié)果見表1：
表1
色譜分離模式樣品名稱批號結(jié)果(%)相對偏差(%) 反相色譜柱檢測氯苯那敏Z-03-080405-0196.82
0.07% 離子交換色譜柱檢測氯苯那敏Z-03-080405-0196.68
2.2 線性回歸試驗(yàn):檢驗(yàn)方法：HPLC法：精密稱取工作對照品0.30g，置100ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。分別精密吸取對照品貯備液0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml分別置25ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即分別得5個對照品溶液。
分別取對照品溶液20μl，注入液相色譜儀中，測定色譜峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出線性方程及R值。線性回歸應(yīng)呈明顯的線性，R值≥0.999。
測定結(jié)果見表2。
表2 線性范圍試驗(yàn)結(jié)果
進(jìn)樣量(μg)1.20122.40244.80489.609614.4144 色譜峰面積6260341222685244324848464987125753
2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)：檢驗(yàn)方法：HPLC法：取氯苯那敏樣品約0.20g，加甲醇溶解并稀釋至25ml，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取同一供試品溶液20μl，按0、2、4、6、8小時時間間隔分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜峰面積，根據(jù)5次峰面積計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤2.0%。
測定結(jié)果見表3。
2.4 精密度試驗(yàn)
(1)重復(fù)性：檢驗(yàn)方法：HPLC法：精密稱取工作對照品(馬來酸氯苯那敏)約0.30g，加流動相溶解并稀釋至25ml，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。另取氯苯那敏樣品約0.20g，分別稱取6份，分別加甲醇稀釋至25ml，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得6份供試品溶液。
取對照溶液20μl、供試品溶液20μl分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜峰面積，根據(jù)峰面積計算供試品含量(%)及樣品含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)≤2%。
測定結(jié)果見表4。
(2)中間精密度：本方案為考察隨機(jī)變動因素對精密度的影響，設(shè)計中間精密度試驗(yàn)。變動因素為不同檢驗(yàn)日期、不同分析人員。檢驗(yàn)方法同重復(fù)性。中間精密度試驗(yàn)：含量相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤2%。中間精密度與重復(fù)性試驗(yàn)含量相對偏差≤0.5%。
測定結(jié)果見表5,表6。
2.5 回收率試驗(yàn):檢驗(yàn)方法：HPLC法：精密稱取工作對照品(馬來酸氯苯那敏)約0.30g，加流動相溶解并稀釋至25ml，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。
取氯苯那敏樣品約0.05g，精密稱定3份，分別置25ml的量瓶中，分別精密加入馬來酸氯苯那敏對照品0.075g，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。編號為1、2、3。
2.6 范圍試驗(yàn):檢驗(yàn)方法： HPLC法： 精密稱取工作對照品 (馬來酸氯苯那敏) 約 0.30g，加流動相溶解并稀釋至25ml，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。另取氯苯那敏樣品約0.20g，加甲醇溶解并稀釋至25ml，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。
取對照溶液20μl、供試品溶液20μl分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜峰面積，根據(jù)峰面積計算供試品含量(%)。含量：≥90.0%。
測定結(jié)果見表8。
表8 范圍試驗(yàn)測定結(jié)果
批號Z-03-080517-01 Z-03-080519-02 Z-03-080522-03 含量 97.4% 97.2% 97.3%
取氯苯那敏樣品約0.10g，精密稱定3份，分別置25ml的量瓶中，分別精密加入馬來酸氯苯那敏對照品0.15g，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。樣品編號為4、5、6。
取氯苯那敏樣品約0.15g，精密稱定3份，分別置25ml的量瓶中，分別精密加入馬來酸氯苯那敏對照品0.22g，加，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取1.0ml，置25ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。編號為7、8、9。
分別取對照溶液和供試品溶液20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，根據(jù)峰面積計算工作對照品加入量，工作對照品計算加入量與實(shí)際加入量之比即為回收率�；厥章蕬�(yīng)在95%~105%之間，回收率相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤2%。
測定結(jié)果見表7。
3 結(jié)論
通過對氯苯那敏含量測定方法的專屬性、線性、穩(wěn)定性、回收率、精密度、范圍等實(shí)驗(yàn)，證明其含量測定方法適應(yīng)檢測要求，可為氯苯那敏含量測定提供可靠的檢測方法，并對馬來酸氯苯那敏的工藝合成配比起到一定的指導(dǎo)作用。
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